Comparação da sensibilidade de Danio rerio, Poecilia reticulata e Xiphophorus helleri a Aeromonas hydrophila e Aeromonas aquariorum

Dissertação de Mestrado em Aquacultura apresentada à ESTM - Escola Superior de Turismo e Tecnologia do Mar do Instituto Politécnico de LeiriaEste trabalho teve como objectivo comparar a sensibilidade de três das principais espécies de peixes ornamentais de água doce, Danio rerio, Poecilia reticulata e Xiphophorus helleri, a duas bactérias potencialmente zoonóticas para o Homem, Aeromonas hydprophila (SM 30016) e Aeromonas aquariorum (DSM 18362). De forma a efectuar a injecção intraperitoneal, foi necessário determinar a dose ideal de anestésico (MS-222) para cada uma das espécies de peixe estudadas, de modo a permitir o manuseamento dos peixes. Este foi o segundo, mas não menos importante, objectivo deste estudo. O critério adoptado para definir “dose ideal de anestésico” foi a dose capaz de provocar o plano 4 de anestesia num peixe em menos de 180 segundos, recuperação em menos de 300 segundos e sobrevivência de 100%, quando os animais são submetidos a uma longa exposição (30 minutos). Para tal foram utilizadas diferentes concentrações de anestésico (75-250 mg/l) nas diferentes espécies estudadas. A sensibilidade para as bactérias foi efectuada pela comparação do valor de dose letal capaz de matar 50% dos peixes (LD50) em 48 horas, através da injecção intraperitoneal de diferentes densidades das referidas bactérias. As doses ideais de MS-222 foram 75, 100 e 125mg/L para D. rerio, 125, 150 e 200 mg/L para P. reticulata e 125 e 150 mg/L para a espécie X. helleri. A espécie Aeromonas hydrophila revelou-se mais virulenta em todas as espécies de peixes relativamente a Aeromonas aquariorum. O LD50 encontrado para a espécie Aeromonas hydrophila foi de 7,87 x 106, 4,12 x 106 e 1,10 x 106 UFC/ml para D. rerio, P. reticulata e X. helleri, respectivamente. Para a espécie.Aeromonas aquariorum os valores de LD50 foram 3,03 x 108 UFC/ml para D. rerio, 1,56 x 108 UFC/ml para P. reticulata e 1,16 x 108 UFC para X. helleri. A sintomatologia observada na infecção por Aeromonas aquariorum e Aeromonas hydrophila foi semelhante em todos os peixes que apresentaram inchaço da cavidade abdominal e zonas hemorrágicas nas brânquias. De todos os antibióticos testados no ensaio in vitro, a Ciprofloxacina foi o único antibiótico com maior eficácia, quer para a Aeromonas aquariorum, quer para a Aeromonas hydrophila. Podemos concluir que a dose ideal de anestésico MS-222 varia para as espécies Danio rerio, Poecilia reticulata e Xiphophorus helleri, onde apenas a dose de 125 mg/l é capaz de anestesiar eficazmente todas as referidas espécies. Todos os peixes foram mais sensíveis à bactéria Aeromonas hydrophila quando comparada com Aeromonas aquariorum. A utilização de ciprofloxacina pode ser uma boa estratégia terapêutica para infecções provocadas por ambas as bactérias, principalmente porque não foi possível observar sintomatologias diferentes nas infecções provocas nestes peixes por Aeromonas hydrophila e Aeromonas aquariorum

Ozonioterapia na COVID-19: uma revisão integrativa

The aim was to demonstrate the available evidence on ozone therapy in patients with COVID-19 and its therapeutic applicability through hospital protocols. This is an integrative review, carried out in PubMed and LILACS search sources, from 2011 to 2021. 87 articles were identified, but 11 articles were selected that suited the studied theme. The literature studied indicated that ozone exerts antiviral activity by inhibiting viral replication and direct inactivation of viruses. It is also an adjuvant to antiviral drugs. Combined treatment with ozone and antivirals has been shown to reduce inflammation and lung damage. The routes of ozone administration were systemic (rectal) and autohemotherapy. Conclusions: Ozone therapy is an adjuvant therapy to antiviral treatment in COVID-19-positive patients, in addition to being economically viable and easy to administer.Objetivou-se demonstrar as evidências disponíveis sobre ozonioterapia em pacientes com COVID-19 e sua aplicabilidade terapêutica por meio de protocolos hospitalares. Trata-se de uma revisão integrativa, realizada nas fontes de busca PubMed e LILACS, no período de 2011 a 2021. Foram identificados 87 artigos, mas, selecionados 11 artigos que se adequaram à temática estudada. A literatura estudada apontou que o ozônio exerce atividade antiviral por meio da inibição da replicação viral e da inativação direta dos vírus. Também é um adjuvante às drogas antivirais. O tratamento combinado com ozônio e os antivirais demonstrou redução da inflamação e dos danos pulmonares. As vias de administração do ozônio foram sistêmica (retal) e auto-hemoterapia. Conclusões: A ozonioterapia é uma terapia adjuvante ao tratamento com antivirais em pacientes COVID-19-positivos, além de ser viável economicamente e de fácil administração

Desenvolvimento e validação de ensaio in vitro para detecção de vírus rábico residual viável em vacina antirrábica inativada

Orientadora: Profª Drª Sonia Mara Raboni.Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa : Curitiba, 28/03/2019.Inclui referências: p. 110-117Resumo: A raiva, uma zoonose viral, causa cerca de 60 mil mortes anuais, sendo os cães responsáveis por 99% da transmissão para humanos. No entanto, a raiva humana é prevenível por meio da vacinação de cães e da profilaxia pós-exposição em humanos utilizando vacinas antirrábicas inativadas. Durante sua produção, vários ensaios obrigatórios de controle de qualidade in vivo, como potência, vírus vivo residual e inocuidade são responsáveis pela utilização de grande quantidade de animais. Ao longo dos últimos anos, organizações mundiais têm estimulado o desenvolvimento de métodos alternativos para substituir, reduzir ou refinar a utilização de animais na indústria farmacêutica. Este projeto propõe desenvolver e validar um ensaio in vitro em substituição ao ensaio in vivo para a determinação de vírus vivo residual, combinando técnicas de isolamento viral com leitura por imunofluorescência direta em placa e quantificação viral por método molecular. A padronização das etapas de recuperação viral e quantificação por RT-qPCR foram realizadas e o ensaio combinado mostrou-se 3 vezes mais sensível que o ensaio in vivo. Foi possível identificar amostras de suspensão viral anteriormente liberadas pelo controle interno, com partículas de vírus rábico ainda viáveis, comprovando a importância da implantação deste método no controle interno da produção da vacina antirrábica. Além disso, o ensaio desenvolvido é mais prático, barato e produz resultados mais rapidamente, em apenas 4 dias, o que pode possibilitar maior agilidade no controle de qualidade interno da vacina. O método in vitro poderá reduzir 2/3 da quantidade de animais de laboratórios utilizados para esse fim, uma vez que pode ser implantado no controle de qualidade intermediário da produção da vacina rábica inativada.Abstract: Rabies, a viral zoonosis, causes nearly 60,000 annual deaths, with dogs accounting for 99% of transmission to humans. However, human rabies is preventable through dog vaccination and pre-exposure prophylaxis in humans, using inactivated rabies vaccines. During their production process, several mandatory in vivo quality control trials, such as potency, live virus and safety are responsible for the use of large numbers of laboratory animals. Over the last few years, global organizations have been encouraging the development of alternative methods to reduce, replace and refine the use of animals in the pharmaceutical industry. This study proposes the development and validation of an in vitro assay replacing the in vivo assay for the determination of residual live virus combining viral isolation techniques with direct immunofluorescence detection and viral quantification by a m olecular method. Standardization of viral recovery steps and quantification by RTqPCR were performed, and the combined method was shown to be 3 fold more sensitive than the in vivo assay. It was possible to identify viral suspensions samples, previously released by the in vivo internal controls, which still had residual viable rabies virus particles, proving the importance to implement this method as an internal quality control of rabies vaccine production. In addition, the assay developed is more practical, cheaper and produces results more quickly, in just 4 days, which may allow greater agility in the internal quality control of the vaccine. The in vitro method may reduce 2/3 of the amount of laboratory animals used for this purpose, since it can be implemented in the intermediate quality control of inactivated rabies vaccine production

Detecção de rotavírus em amostras de águas de superfície através de técnicas moleculares e de cultivo celular

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.Atualmente a contaminação do ambiente aquático e conseqüentemente dos recursos hídricos, vêm tomando importância frente à preocupação com a escassez da água. Diariamente, diferentes tipos de reservatórios de águas estão sendo saturados por contaminantes das mais diversas fontes, tornando as águas impróprias para consumo, para o desenvolvimento de atividades agrícolas e para recreação. Grande parcela da população que não possui tratamento adequado dos efluentes sendo as que mais sofrem com este problema, uma vez que são os principais atingidos por doenças de veiculação hídrica. Entre os principais contaminantes do ambiente aquático estão os vírus entéricos, responsáveis pela maioria de casos das doenças diarréicas no mundo, além de algumas formas de hepatites como também otites e conjuntivites, entre outras doenças. Os vírus entéricos infectam o homem através da via fecal-oral e replicam-se no trato gastrointestinal, causando as conhecidas gastroenterites. Dentre os vírus entéricos mais relevantes estão os rotavírus, que causam anualmente milhares de casos de diarréias em todo o mundo, principalmente em crianças com idade de até cinco anos. Os rotavírus possuem uma enorme variabilidade de sorotipos circulantes, sendo que a detecção da presença dos mesmos em diferentes tipos de águas de superfície se torna de alta importância uma vez que pode contribuir para futuros estudos epidemiológicos e evidenciar a necessidade do tratamento adequado dos efluentes despejados nos reservatórios aquáticos. O desenvolvimento de métodos para o monitoramento da qualidade sanitária da água se faz necessário para assegurar a qualidade da água distribuída à população, uma vez que os padrões de qualidade atuais, baseados nos níveis bacterianos, não possuem uma boa correlação com contaminação viral. Sendo assim, o presente trabalho de conclusão de curso teve por objetivo principal padronizar métodos de detecção de contaminantes virais em águas de superfície utilizando os rotavírus como modelo viral. A escolha de diferentes tipos de águas analisados durante o trabalho (amostras de campo) foi de grande importância uma vez que permitiu verificar se tal metodologia possui eficácia na detecção de contaminantes virais entéricos. Os métodos de detecção envolveram inicialmente a concentração viral por filtração, extração do material genético pelo método da sílica e posterior detecção por técnicas de RT-PCR e técnicas de cultura celular, esta última permitindo inclusive avaliar a viabilidade das partículas virais. Os resultados demonstraram que a metodologia empregada neste trabalho foi de grande eficiência em relação à detecção do genoma do rotavírus pela reação de RT-PCR. A utilização da água destilada foi a que resultou no melhor índice de recuperação viral (100%). Para os demais tipos de águas (água do mar e esgoto tratado), os resultados de recuperação viral foram pouco expressivos, uma vez que nestes tipos de amostras há a presença de diversos inibidores da reação de RT-PCR. Nas análises das amostras de campo, os resultados indicam que a metodologia utilizada propiciou uma detecção eficiente do genoma do rotavírus em diversas amostras, sendo algumas destas positivas em diversas análises ao longo de um ano de coleta. Das amostras positivas para a presença do genoma do rotavírus que foram submetidas ao ensaio de ICC-RT-PCR, duas amostras de esgoto da localidade do córrego do bairro Monte Verde foram positivas, o que demonstra a diminuta viabilidade do rotavírus em águas de superfície. A continuidade deste trabalho, com a realização da reação de PCR em tempo real das amostras de campo analisadas, permitirá melhores respostas, uma vez que a quantificação viral mostrará a real perda que ocorreu durante a utilização do método de filtração e concentração viral

ANÁLISE DA EFICÁCIA IMUNOLÓGICA DA UTILIZAÇÃO DA VITAMINA D EM PACIENTES INFECTADOS COM NOVO COROVAVÍRUS (SARS-CoV-2) E TAMBÉM PARA FINS PROFILÁTICOS CONTRA A INFECÇÃO DE COVID-19

The novel coronavirus outbreak has triggered a rapid response from clinicians and life sciences researchers globally. Resultant advances in research show promise not only for tackling the current pandemic but also for informing future infectious disease diagnostics. We are going through a tough time. COVID-19 or SARS CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2) causes pandemic in the whole world. Apart from quarantine some health measures are desperately needed to be taken as well. Mortality from COVID-19 is higher in some countries than the others. Many factors are playing essential role in this disparity including elderly people in population, general health, quality and accessibility of healthcare, socioeconomic status and most importantly Vitamin D status in the population. In this article we will be giving insights to the roles of Vitamin D in reducing respiratory tract infection, knowledge about influenza and COVID-19 epidemiology and how Vitamin D can reduce the risk. Vitamin D can reduce the risk via several mechanisms such as inducing cathelicidins and defisins which can lower the rate of viral replication, reducing pro inflammatory cytokines concentration which can injure the lining of the lungs leading to pneumonia and increasing the anti-inflammatory cytokines concentration. Vitamin D can lower the risk of COVID-19 outbreak in winter when the concentration of 25 Hydroxy Vitamin D or 25(OH) D will be lowest. Deficiency of vitamin D can cause acute respiratory distress syndrome, increase fatality rate in aged people when 25(OH) D concentration is lower. So it is required to take 10,000 IU/d of Vitamin D3 to raise 25(OH) D for few weeks followed by 5,000 IU/d. The concentration of 25(OH) D in the body should be higher than 40-60 ng/ml (100-150 nmole/L) to lower the risk of COVID-19. O novo surto de novo coronavírus (SARS-COV-2) desencadeou uma resposta rápida de médicos e pesquisadores de ciências biológicas em todo o mundo. Os avanços resultantes na pesquisa mostram-se promissores não apenas para lidar com a pandemia atual, mas também para informar futuros diagnósticos de doenças infecciosas. Estamos passando por um momento difícil. COVID-19 ou SARS CoV-2 (Síndrome Respiratória Aguda Grave Coronavírus 2) causa pandemia em todo o mundo. Além da quarentena, algumas medidas de saúde precisam ser desesperadamente tomadas também. A mortalidade por COVID-19 é mais alta em alguns países do que em outros. Muitos fatores estão desempenhando um papel essencial nessa disparidade, incluindo idosos na população, saúde geral, qualidade e acessibilidade aos cuidados de saúde, status socioeconômico e, mais importante, status de vitamina D na população. Neste artigo, daremos informações sobre os papeis da vitamina D na redução da infecção do trato respiratório, conhecimento sobre a influenza e a epidemiologia do COVID-19 e como a vitamina D pode reduzir o risco. A vitamina D pode reduzir o risco por meio de vários mecanismos, como a indução de catelicidinas e defisinas, que podem diminuir a taxa de replicação viral, reduzindo a concentração de citocinas pró-inflamatórias que podem lesar o revestimento dos pulmões, levando à pneumonia e aumentando a concentração de citocinas anti-inflamatórias. A vitamina D pode reduzir o risco de surto de COVID-19 no inverno, quando a concentração de 25 hidroxi vitamina D ou 25 (OH) D será mais baixa. A deficiência de vitamina D pode causar síndrome do desconforto respiratório agudo e aumentar a taxa de letalidade em idosos quando a concentração de 25 (OH) D é menor. Portanto, é necessário tomar 10.000 UI / d de vitamina D3 para aumentar a 25 (OH) D por algumas semanas, seguido de 5.000 UI / d. A concentração de 25 (OH) D no corpo deve ser superior a 40-60 ng / ml (100-150 nmol / L) para diminuir o risco de COVID-19

Avanços na transferência de embriões em caprinos e ovinos de corte no Brasil.

Atualmente, a caprino-ovinocultura apresenta-se em crescimento tecnológico e expansão numérica nas diversas regiões do Brasil. O incremento de sua produtividade interligada ao melhoramento genético está atrelado ao emprego de diversas biotecnologias de reprodução assistida, a exemplo da transferência de embriões (TE), a qual reúne uma série de metodologias para o cumprimento de todas as etapas de condução. A TE encontra-se em plena atividade de desenvolvimento e crescimento no aprimoramento de execução por muitos técnicos em nosso país. Representa uma capacidade exeqüível na rápida multiplicação de animais portadores de características zootécnicas desejáveis por meio do aproveitamento intensivo de uma fêmea em fase de vida reprodutiva

Métodos em microbiologia ambiental

Material didático para utilização em cursos de área da microbiologia.N/

Detecção e quantificação de patógenos entéricos virais em amostras de água do mar

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011A preocupação com a contaminação do ambiente aquático e, consequentemente, dos recursos hídricos, têm crescido devido a uma possível escassez da água potável no planeta. A contaminação das águas costeiras por vírus entéricos é causada pelo despejo de resíduos de origem fecal, afetando as águas utilizadas em atividades de recreação, pesca e no cultivo de moluscos bivalves, sendo responsável pela maioria dos surtos de gastroenterites que ocorrem no mundo. Indicadores bacterianos de contaminação fecal como os coliformes fecais, têm sido utilizados para o controle da qualidade das águas, porém já é estabelecido em todo o mundo que esta contaminação não está correlacionada com a presença de vírus entéricos. O desenvolvimento de novos métodos de concentração e detecção de vírus entéricos é uma alternativa para o controle da contaminação destas águas a fim de assegurar a qualidade de uso das mesmas. Os objetivos deste estudo foram: 1) Padronizar a metodologia de floculação utilizando leite desnatado acidificado na concentração de vírus em amostras de água do mar natural e artificial semeadas com quantidades conhecidas de adenovírus do sorotipo 2 (HAdV2). Comparar os resultados obtidos na recuperação viral com a metodologia já padronizada de filtração em membrana eletronegativa e reconcentração em Centriprep; 2) Aplicar metodologia padronizada na concentração e detecção de adenovírus humanos, poliomavírus cepa JC, vírus da hepatite A (HAV) e norovírus humano (HuNoV genogrupos GI e GII) em amostras de água do mar de 11 praias ao redor da Ilha de Santa Catarina, Florianópolis, Brasil durante um ano (Agosto de 2009 a Julho de 2010). 3) Analisar a presença de coliformes fecais (E. coli) e avaliar parâmetros físico-químicos, temperatura, pH, salinidade e oxigênio dissolvido. Para as detecções virais, o material genético das amostras foi extraído e diluído 1:10 para a redução de inibidores das reações enzimáticas. Nested-PCR qualitativo foi usado na detecção de HAdV e para a realização do sequenciamento. A detecção e quantificação de todos os vírus pesquisados foi realizada por PCR em tempo real. Os resultados da recuperação viral quando a metodologia de floculação foi empregada foram de 14% e 13,6% e no método de filtração, foram de 2,8% e 21% para as amostras de água do mar natural e artificial respectivamente. Das 132 amostras de campo analisadas, 16% foram positivas nas reações de nested-PCR para HAdV. Nas análises de PCR em tempo real, o vírus mais prevalente foi o HAdV, com 55% das amostras positivas, com intervalos de detecção de 8,40 x 103 a 1,9 x 107 CG/ L, seguido pelo HAV, com 51,5% de positividade, variando de 1,60 x 101 a 2,30 x 103 CG/ L. Para o JCPyV, 3% das amostras foram positivas, com intervalos de 1,90 x 104 a 1,70 x 105 CG/ L e para o NoV 7,5% e 4,5% das amostras foram positivas, com intervalos entre 2,41 x 103 a 5,14 x 106 e 3,73 x 104 a 2,10 x 106 CG/ L respectivamente para o GI e GII. As médias obtidas para os valores de coliformes fecais detectados foram de 8,0 a 1,325 UFC/100 mL em todos os pontos analisados. Somente dois dos pontos analisados não ultrapassaram o tolerável (Joaquina e Mole). Os demais pontos tiveram valores acima do permitido em algum mês do período analisado, destacando-se a Beira-Mar Norte com os valores mais elevados. As análises físico-químicas demonstraram valores concordantes com os previstos na legislação. O sequenciamento das amostras positivas para o HAdV demonstraram prevalência do adenovírus humano respiratório sorotipo 2. Os resultados obtidos evidenciam o destaque da contaminação viral nas amostras de água do mar e confirmam a não correlação da presença destes em relação à contaminação bacteriana. Este é o primeiro trabalho que avalia as condições das praias a redor da Ilha de Santa Catarina de forma mais abrangente, destacando diferentes tipos de contaminação.The concern about aquatic environment contamination and consequently water resources is increasing mainly due to the warning about potable water scarcity in our planet. The contamination of coastal waters by enteric viruses is caused by discharge of residues of fecal origin, affecting waters used for recreational activities, fishing and shellfish growing, being responsible for most outbreaks of gastroenteritis occurring in the world. Bacterial indicators such as fecal coliforms have been used as parameters of water quality, however it has been clearly established worldwide that bacterial contamination show no relationship with the presence of human enteric viruses. The development of new methods of water concentration for enteric viruses detection is an alternative to monitor the contamination of these waters in order to ensure its quality.The objectives of this study were: 1) Standardize the methodology of flocculation using acidified skimmed milk for viral concentration in natural and artificial seawater samples previously spiked with known amounts of human adenoviruses serotype 2 (HAdV2). Results obtained with viral recovery were compared with the standardized methodology of water filtration in electronegative membrane and reconcentration by Centriprep#; 2) Apply standardized methodology in the concentration and detection of HAdV, poliomavirus (JCPyV), hepatitis A vírus (HAV) and noroviruses (HuNoV GI and GII) in seawater samples harvested in 11 different beaches in Santa Catarina Island, Florianópolis, Brazil in a period of one year (August 2009 to July 2010). Were also measured the presence of fecal coliform (E. coli) and physical-chemical parameters such as temperature, pH, salinity and dissolved oxygen. To reduce the presence of inhibitors of PCR reactions, a tenfold dilution of DNA/RNA of each sample was used. Nested-PCR was used for qualitative detection of HAdV and for conducting sequencing analysis. The detection and quantification of all the viruses evaluated was performed by real time PCR. The results of viral recovery by the standardized method of flocculation were 14% and 13.6% and for the filtration method, were 2.8% and 21% for samples of natural and artificial seawater respectively. From 132 field samples analyzed, 16% of these were positive for HAdV in the nested-PCR assay. In the analysis of real-time PCR, the most prevalent virus was HAdV, with 55% of positive samples with intervals of detection of 8.40 x 103 to 1.90 x 107 GC/ L, followed by HAV, with 51,5% of positivity, ranging from 2.30 x 101 to 1.60 x 103 GC/ L. For JCPyV, 3% of samples were positive, with ranges between 1.90 x 104 to 1.70 x 105 GC/ L and for NoV 7.5% and 4.5% of samples were positive, with intervals between 2.41 x 103 to 5.14 x 106 and 3.73 x 104 to 2.10 x 106 GC/ L respectively for GI and GII. The mean values of fecal coliforms detected were from 8.0 to 1.325 CFU/100 mL at all sites analyzed. Only two sites analyzed did not exceed the allowed by current legislation (Joaquina and Mole). The other sites showed, sometimes, values above the allowed during the period analyzed, with emphasis for Beira-Mar Norte site presenting the highest values. The physical-chemical analysis demonstrated values consistent with those recommended by legislation. The sequencing analysis of the samples positive for HAdV in qualitative PCR showed prevalence of human adenovirus respiratory serotype 2. The results show the highlight of viral contamination in the seawater samples and confirm the lack of correlation of their presence in relation to the bacterial contamination. This is the first study evaluating the conditions of the beaches around the Santa Catarina Island, highlighting different types of contamination